تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل (RT-PCR) مقابل تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي في مختبر اختبار الحمض النووي للطيور

ما هو النظام الأفضل لاختبار جنس الطيور، والكشف عن فيروسات الطيور، وعلم وراثة الحمام الزاجل؟

في مختبرات الطيور الحديثة، يعد أحد أكبر القرارات التقنية في مختبرات الطيور الحديثة:

هل يجب على مختبر اختبار الحمض النووي للطيور استخدام معدات PCR التقليدية أو معدات RT-PCR؟

للوهلة الأولى، قد تبدو الإجابة بسيطة:

• تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي أرخص
• تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميري أكثر تقدمًا

ولكن بعد سنوات من تشغيل مختبر تجاري حقيقي للحمض النووي للطيور في مركز SENO لاختبار الحمض النووي للطيور, اكتشفنا شيئاً مهماً:

الفرق الحقيقي ليس فقط في الآلة نفسها.
يظهر الفرق الحقيقي في كفاءة سير العمل وتكلفة العمالة وقابلية التوسع والتحكم في التلوث وسرعة خدمة العملاء.

تشرح هذه المقالة الاختلافات العملية بين تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميري التقليدي باستخدام أمثلة حقيقية من:

• اختبار جنس الطائر
• اختبار فيروسات الطيور
• تحليل الحمام الزاجل الوراثي

سنشرح أيضاً:

• لماذا تتحول العديد من المختبرات في نهاية المطاف إلى تقنية RT-PCR
• لماذا لا يزال تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي ذا قيمة
• وكيف تناسب التقنيات المختلفة نماذج الأعمال المختلفة.

إجابة مباشرة: تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل المتسلسل التقليدي

يعد كل من RT-PCR و PCR التقليدي من التقنيات المهمة في مختبرات اختبار الحمض النووي للطيور.

ومع ذلك، فقد تم تحسينها لمواقف مختلفة.

بعبارات بسيطة:

هناك تشبيه مفيد هو هذا:

تشبه تقنية PCR التقليدية طباعة الصور الفوتوغرافية وتحميضها يدوياً في غرفة مظلمة.
يشبه تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميري استخدام كاميرا رقمية حديثة مزودة بمعالجة تلقائية للصور.

يمكن أن يؤدي كلاهما إلى نتائج ممتازة.
ولكن بمجرد أن يصبح الحجم كبيراً، تغير الأتمتة كل شيء.

ما هو تفاعل البوليميراز المتسلسل في اختبار الحمض النووي للطيور؟

يرمز PCR لـ

$PCR = تفاعل البوليميراز المتسلسل/التفاعل المتسلسل$تفاعل البوليميراز المتسلسل = تفاعل البوليميراز المتسلسل

الهدف من PCR بسيط:

خذ كمية ضئيلة من الحمض النووي واصنع ملايين النسخ حتى يتمكن المختبر من اكتشافه.

عادةً ما تحتوي عينات الحمض النووي للطيور على كميات صغيرة جدًا من المادة الوراثية.

على سبيل المثال:

• بصيلات الريش
• بقع الدم
• مسحات الفم
• مسحات كلوكال

فبدون التضخيم، سيكون الحمض النووي أقل من أن يتم تحليله.

تصوّر بسيط:

$Tiny\ DNA\ Sample \rightarrow PCR\ Amplification \rightarrow Millions\ of\ DNA\ Copies$عينة صغيرة من الحمض النووي ← تضخيم الحمض النووي ← ملايين من نسخ الحمض النووي

ما هو الفرق الحقيقي بين RT-PCR و PCR التقليدي؟

تُبالغ العديد من المقالات في تبسيط هذه المسألة بالقول:

“يكمن الفرق في كيفية اكتشاف النتائج.”

هذا صحيح من الناحية الفنية - ولكن في المختبرات الحقيقية، يكون الفرق أعمق بكثير.

يتصرف النظامان تقريباً مثل فلسفتين مختلفتين للإنتاج.

تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي: التضخيم أولاً، ثم التحليل لاحقاً

يعمل تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي على مرحلتين رئيسيتين:

الخطوة 1 - تضخيم الحمض النووي

يقوم جهاز PCR بتسخين العينات وتبريدها بشكل متكرر لتضخيم الحمض النووي.

الخطوة 2 - الرحلان الكهربائي الهلامي

بعد التضخيم، يجب على الفنيين:

• تحضير هلام الأغاروز
• إضافة صبغة
• تحميل العينات يدويًا
• تشغيل الرحلان الكهربائي
• تصور نطاقات الحمض النووي باستخدام الأشعة فوق البنفسجية

هذا هو المكان الذي تظهر فيه معظم العمالة الخفية.

تشبيه مفيد:

يشبه PCR التقليدي خبز الخبز ثم فحص كل رغيف يدويًا بعد ذلك.

تنتهي آلة PCR نفسها بسرعة.
لكن عملية التحقق تتطلب

• المزيد من الوقت
• المزيد من المعدات
• المزيد من الفنيين
• المزيد من خطوات المناولة

RT-PCR: يحدث الاكتشاف أثناء التضخيم

يعمل تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل اللحظي أو تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (RT-PCR) بشكل مختلف.

فبدلاً من الانتظار حتى النهاية لفحص الحمض النووي يدويًا، تراقب الآلة التضخيم في الوقت الفعلي باستخدام إشارات التألق.

يتصرف المسبار إلى حد ما مثل:

منارة تتبع متوهجة متصلة بتفاعل الحمض النووي.

عند حدوث التضخيم:

• زيادة التألق
• تظهر المنحنيات تلقائيًا
• برنامج يحلل النتائج على الفور

وهذا يعني:

• لا يوجد رحلان كهربائي هلامي
• لا يوجد فحص يدوي لنطاق الحمض النووي
• معالجة أقل للعينات
• إعداد تقارير أسرع

تشبيه بسيط:

يشبه اختبار PCR التقليدي تدقيق أوراق امتحانات الطلاب يدوياً بعد انتهاء الفصل الدراسي.
يشبه اختبار RT-PCR جهاز كمبيوتر يقوم بتصحيح كل إجابة تلقائيًا أثناء إجراء الاختبار.

لماذا قمنا بتحويل معظم اختبارات جنس الطيور إلى اختبار RT-PCR

في مختبر SENO, اختبار جنس الطائر هي أكبر فئة اختبار لدينا.

نحن نعالج:

• مئات العينات يومياً
• غالبًا ما تكون 30-60 عينة لكل شحنة مزرعة طيور
• وأحيانًا أكثر من ذلك بكثير خلال مواسم ذروة التكاثر

منذ سنوات، كنا نعتقد في البداية أن تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي أرخص ثمناً.

على الورق

• كانت كواشف تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدية أقل تكلفة
• كان الاستثمار في المعدات أقل

لكن العملية الواسعة النطاق غيرت مفهومنا تماماً.

عنق الزجاجة الخفي الرحلان الكهربائي الهلامي

لم تكن المشكلة الأكبر هي PCR نفسها.

المشكلة كانت:

جل الجري.

يمكن لماكينة PCR القياسية معالجة

$96\ صامبلس/بير/ بي سي آر/ رن$96 عينة لكل عملية تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل

لكن إعداد الرحلان الكهربي الهلامي النموذجي قد يعالج فقط:

$12 \ صامبلات \ بير / جيل \ رن$12 عينة لكل تشغيل هلامي

وهذا يؤدي إلى اختلال شديد في التوازن.

يصبح جهاز PCR سريعًا.
يصبح سير العمل الهلامي بطيئاً.

مثال حقيقي من مختبرنا

لنفترض أننا نتلقى:

$150 \ طائر 150 \ طائر \ جنس \ عينات$150 عينة جنس الطير 150 عينة جنس الطير

سير عمل تقنية RT-PCR

باستخدام:

• 2 ماكينات RT-PCR
• أنظمة 96 بئر 96

الجدول الزمني النموذجي:

سير عمل تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي

قد يكون وقت تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل متشابهًا.

ولكن بعد ذلك

• يجب تحضير المواد الهلامية
• عينات تم تحميلها يدويًا
• إجراء الرحلان الكهربائي
• نتائج مفسرة بصريًا

إذا تعامل هلام واحد مع 12 عينة فقط:

$150 \ عينات \ التقسيم 12 \ حوالي 13 \ جيل \ جولات$150 عينة ÷ 12 ≈13 تشغيلات هلامية

حتى مع:

• 8-10 علب هلامية
• فنيون متعددون

قد يحتاجها المختبر:

• عدة ساعات إضافية
• المزيد من العمالة
• مخاطر تلوث أعلى بكثير

هذا هو المكان الذي يصبح فيه تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميري متفوقًا اقتصاديًا.

الحقيقة المدهشة: تكاليف العمالة تصبح أكبر من تكاليف الكواشف

كان هذا أحد أكبر الدروس المستفادة من تجربتنا المعملية.

ركزنا في البداية على:

• سعر الكاشف
• سعر المعدات

ولكن بمجرد زيادة حجم العينة اكتشفنا

أصبحت العمالة أكثر تكلفة من الكواشف.

يتطلب تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي:

• المزيد من وقت الفنيين
• المزيد من المعالجة المتكررة
• المزيد من التفسير اليدوي
• المزيد من إدارة سير العمل

وفي الوقت نفسه، يعمل تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميري على أتمتة الكثير من العملية.

لماذا تصبح تكاليف كاشف RT-PCR أقل أهمية على نطاق واسع

وهناك اعتقاد خاطئ آخر:

“دائمًا ما تكون كواشف RT-PCR أغلى بكثير.”

صحيح جزئياً - لكنه غير مكتمل.

غالبًا ما يكون الجزء الأكثر تكلفة في عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل (RT-PCR):

• مجسات الفلورسنت

ومع ذلك، في المختبرات واسعة النطاق:

• الشراء بالجملة يخفض التكلفة
• استهلاك كاشف كبير يحسن الكفاءة
• تقلل الأتمتة من الاعتماد على العمالة

في النهاية

• وفورات العمالة تفوق الفروق في تكلفة الفحص

وهذا هو السبب في انتقال العديد من المختبرات عالية الإنتاجية في نهاية المطاف إلى أنظمة RT-PCR.

أهمية النتائج الأسرع في اختبار الحمض النووي للطيور

نادراً ما يفكر العملاء في سير عمل المختبر.

ما يهمهم حقاً هو

• نتائج سريعة
• تقارير موثوقة
• الحد الأدنى من التأخير

لمربي الطيور

• تأخر الجنس المتأخر يعني تأخر المبيعات
• قرارات الاقتران المتأخرة
• جداول التكاثر المتأخرة

تعمل سرعة الإنجاز على تحسين تجربة العملاء بشكل مباشر.

يتحسن RT-PCR بشكل كبير:

• سرعة الإبلاغ
• التدفق التشغيلي
• قابلية التوسع

وهذا أحد الأسباب التي تجعل العديد من مختبرات الحمض النووي للطيور الحديثة تعطي الأولوية لأنظمة RT-PCR.

تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل (RT-PCR) مقابل تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي في اختبار فيروسات الطيور

يخلق اختبار الفيروسات وضعاً مختلفاً.

من المثير للاهتمام

يكون الفرق بين تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي وتفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميري المتسلسل (RT-PCR) أصغر في بعض مهام سير العمل البحثية المتعلقة بالفيروسات.

في مختبر SENO:

• عادة ما يكون تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميري هو الطريقة الأساسية
• يستخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي أحيانًا كتحقق ثانوي

لماذا تهيمن تقنية RT-PCR على أبحاث اختبار الفيروسات

يوفر RT-PCR العديد من المزايا المهمة:

1. حساسية أعلى

اكتشاف الحمل الفيروسي المنخفض أسهل.

2. التحليل الكمي

توفر قيم الأشعة المقطعية المقطعية معلومات إضافية.

3. استجابة أسرع

أمر بالغ الأهمية لمكافحة تفشي المرض.

4. الكشف المتعدد المضاعفات

يمكن اختبار العديد من مسببات الأمراض في وقت واحد.

مشكلة “الإيجابية الضعيفة”

نادراً ما يكون العمل المخبري الحقيقي أبيض وأسود.

في بعض الأحيان:

• تظهر منحنيات التألق بوضوح
• لكن قيم التصوير المقطعي المحوسب تقع خارج الحدود الموجبة المؤكدة

يمكن تصنيف هذه الحالات على النحو التالي:

الإيجابيات الضعيفة

في مثل هذه الحالات:

• قد لا يزال من الممكن أن يساعد PCR التقليدي
• يوفر التحقق من الهلام دليلاً ثانوياً

لهذا السبب لا يزال تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي مفيدًا في المختبرات البحثية.

تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل (RT-PCR) مقابل تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي في علم وراثة الحمام الزاجل

هذا هو المكان الذي يصبح فيه تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميري أكثر عملية بشكل كبير.

عصري الاختبار الوراثي لأداء الحمام الزاجل في السباقات غالبًا ما تتضمن:

• مواضع جينية متعددة
• مقارنة التألق
• تفسير النمط الجيني

يصبح تفاعل البوليميراز المتسلسل الهلامي التقليدي صعبًا للغاية هنا.

مثال: اختبار CRY1

قد يتضمن تحليل CRY1 ما يلي:

$3\ جينيتيك \ لوكي \ مقارنة$3 مقارنة المواقع الوراثية

يتم تحديد النمط الجيني من خلال:

• منحنيات التألق المتداخلة
• علاقات قيمة التصوير المقطعي المحوسب
• تفسير الإشارة

وهذا أمر صعب للغاية باستخدام الرحلان الكهربائي الهلامي وحده.

مثال: اختبار DRD4

قد يتضمن اختبار DRD4:

$2 \ فلوروسيسينسيسينس / منحنيات العلامات$2 منحنيات علامات التألق 2

مرة أخرى:

• يعتبر تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميري أكثر عملية
• التحليل متعدد المضاعفات أسهل
• تعمل الأتمتة على تحسين الاتساق

لماذا يستخدم علم الوراثة الحديث للحمام الزاجل في السباقات الحديثة للتسلسل التسلسلي أو التسلسل الوراثي للحمام

يعتمد علم وراثة الحمام الحديث المرتبط بالأداء الحديث بشكل متزايد على:

• تحليل متعدد البؤر
• الكشف عن التألق
• تدفقات عمل قابلة للتطوير
• أتمتة عالية الإنتاجية

لهذا السبب:

• RT-PCR
  و
• تقنيات التسلسل

أصبحت مهيمنة في المختبرات الوراثية للحمام الزاجل المتقدم في السباقات.

هل لا يزال تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي ذا قيمة؟

بكل تأكيد.

لا يزال للـ PCR التقليدي قيمة كبيرة في:

• مختبرات بدء التشغيل الصغيرة
• البيئات التعليمية
• اختبار الحجم المنخفض
• التحقق الثانوي
• العمليات الحساسة للميزانية

لا تزال التقنية صالحة علمياً.

المشكلة الرئيسية هي قابلية التوسع.

ما النظام الذي يجب أن يختاره مختبر الحمض النووي للطيور الجديد؟

تعتمد الإجابة على:

• حجم العينة
• الميزانية
• نموذج العمل
• الأهداف طويلة الأجل

تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي أفضل لـ

• ميزانية بدء تشغيل منخفضة
• الاستخدام التعليمي
• حجم العينة اليومي المنخفض
• تعلم سير عمل البيولوجيا الجزيئية

RT-PCR أفضل لـ

• التحجيم التجاري
• تحديد جنس الطيور عالية الإنتاجية
• اختبار فيروسات الطيور
• علم وراثة الحمام الزاجل
• خدمات الاستجابة السريعة
• تقليل الاعتماد على العمالة

الملخص

إن الفرق بين تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل (RT-PCR) و تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي ليس ببساطة:

“التكنولوجيا القديمة مقابل التكنولوجيا الجديدة.”

الفرق الحقيقي هو:

• بنية سير العمل
• قابلية التوسع
• كفاءة العمالة
• مكافحة التلوث
• سرعة الإبلاغ
• الاقتصاد التشغيلي

في مركز SENO لاختبار الحمض النووي للطيور, ، أظهرت تجربتنا في معالجة اختبارات الحمض النووي للطيور على نطاق واسع أن

مع زيادة حجم العينة، تصبح الكفاءة أكثر أهمية من توفير الكواشف النظرية.

يظل تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي ذا قيمة.

ولكن بالنسبة لمختبرات الحمض النووي للطيور التجارية الحديثة التي تتعامل مع الحمض النووي للطيور:

• اختبار جنس الطائر
• تحليل فيروسات الطيور
• أبحاث الحمام الزاجل الوراثية

أصبح تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميري هو الحل الأكثر قابلية للتطوير والعملية.

الأسئلة الشائعة

هل تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميري أكثر دقة من تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي؟

يمكن أن يكون كلاهما دقيقًا للغاية عند تحسينه بشكل صحيح. يوفر تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل أتمتة أفضل ومراقبة أسهل للتلوث.

لماذا تفضل مختبرات الحمض النووي للطيور الكبيرة مختبرات الحمض النووي الريبي المنقوص الأكسجين (RT-PCR)؟

لأن ارتفاع حجم العينة يجعل الرحلان الكهربي الهلامي اليدوي غير فعال وكثيف العمالة.

هل عفا الزمن على PCR التقليدي؟

لا، لا تزال لها قيمة في التعليم والمختبرات الصغيرة والتحقق من النتائج.

لماذا يعد تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميري مهمًا في علم وراثة الحمام الزاجل؟

لأن العديد من الاختبارات تتطلب تحليلاً فلورياً متعدد البؤر لا يمكن أن يقوم به تفاعل البوليميراز المتسلسل الهلامي التقليدي بكفاءة.

هل لا يزال بإمكان تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي المساعدة في اختبار الفيروسات؟

نعم. وغالبًا ما يتم استخدامه كطريقة تأكيد ثانوية للعينات الإيجابية الضعيفة.

نقوم في مختبر SENO بمعالجة المئات من عينات الحمض النووي للطيور يوميًا باستخدام أنظمة RT-PCR عالية الإنتاجية لاختبار جنس الببغاء والكشف عن الفيروسات والتحليل الجزيئي للحمام الزاجل.

الأسئلة الشائعة

ما هو الفرق الرئيسي بين RT-PCR و PCR التقليدي؟

يكتشف تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي الحمض النووي عن طريق تضخيم التسلسلات المستهدفة وتحليل النتائج بعد اكتمال التفاعل، عادةً من خلال الرحلان الكهربائي الهلامي. ويستخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل المتسلسل في الوقت الحقيقي إشارات فلورية لمراقبة التضخيم أثناء عملية التفاعل، مما يسمح بتحليل النتائج بشكل أسرع وأكثر آلية في مختبرات الحمض النووي للطيور الحديثة.

لماذا تفضل العديد من مختبرات الحمض النووي للطيور تقنية RT-PCR؟

تفضل العديد من مختبرات الحمض النووي للطيور تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل البوليميري لأنها تحسن كفاءة سير العمل، وتقلل من التفسير اليدوي، وتقلل من مخاطر التلوث أثناء معالجة ما بعد تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميري، وتدعم معالجة العينات عالية الإنتاجية.

هل لا يزال يستخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي في اختبار الحمض النووي للطيور؟

نعم، لا يزال تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي يستخدم على نطاق واسع في العديد من مختبرات الطيور لأن تكلفة المعدات أقل ولا تزال الطريقة موثوقة للغاية لتحديد الحمض النووي الأساسي واختبار جنس الطيور.

هل توفر تقنية RT-PCR نتائج أكثر دقة للحمض النووي للطيور؟

عندما يتم جمع العينات بشكل صحيح، يمكن أن يحقق كل من تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل التقليدي معدلات دقة عالية جدًا. ويرتبط الفرق عادةً بكفاءة سير العمل والأتمتة والقدرة على الكشف عن التألق والتحكم في التلوث بدلاً من تضخيم الحمض النووي الأساسي نفسه.

لماذا يتطلب تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي الرحلان الكهربائي الهلامي؟

عادةً ما يتطلب تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي الرحلان الكهربائي الهلامي الهلامي الأغاروزي لتصور نطاقات الحمض النووي المضخم بعد التفاعل. وتساعد هذه الخطوة فنيي المختبر على التأكد من وجود جزء الحمض النووي المستهدف من عدمه.

ما هي أنواع عينات الطيور التي يمكن استخدامها لاختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل؟

تشمل عينات تفاعل البوليميراز المتسلسل الشائعة للطيور الريش الطازج مع البصيلات وبطاقات الدم وعينات الأنسجة وأغشية قشر البيض ومسحات الفم أو العرقوب اعتمادًا على الغرض من الاختبار.

هل يمكن إجراء اختبار PCR في مختبر منزلي صغير؟

وتتوفر الآن أنظمة تفاعل البوليميراز المتسلسل صغيرة الحجم وأدوات مدمجة لتفاعل البوليميراز المتسلسل بالتناوب التسلسلي المتسلسل لأغراض البحث التعليمي والتدريب المختبري. ومع ذلك، لا يزال الاختبار الدقيق للحمض النووي للطيور يتطلب التحكم السليم في التلوث، والتعامل مع الكواشف، والمعرفة بالبيولوجيا الجزيئية.

لماذا يعد تلوث العينة مشكلة كبيرة في اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل؟

تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل حساسة للغاية. يمكن أن تتداخل الكميات الصغيرة من تلوث الحمض النووي الخارجي من اليدين أو المقص أو عينات الريش المختلطة مع نتائج التضخيم وتقلل من موثوقية الاختبار.

هل تفاعل البوليميراز المتسلسل البوليميراز المتسلسل اللحظي هو نفسه تفاعل البوليميراز المتسلسل اللحظي الكمي؟

في العديد من المناقشات المختبرية، غالبًا ما يُستخدم مصطلح RT-PCR بالتبادل مع PCR في الوقت الحقيقي أو qPCR. ومع ذلك، من الناحية الفنية، يمكن أن يشير مصطلح RT-PCR أيضًا إلى تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي المستخدم لتحليل الحمض النووي الريبي. في مختبرات اختبار الحمض النووي للطيور، يشير المصطلح عادةً إلى أنظمة تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي.